科研服務(wù)
SCIENTIFIC SERVICE
基因敲除細(xì)胞系的建立
1.服務(wù)信息
流程分布 |
周期工作日 |
提交內(nèi)容 |
CRISPR設(shè)計 |
2 |
專業(yè)設(shè)計報告 |
客戶確認(rèn) |
1-2 |
客戶回復(fù) |
引物合成 |
2 |
獲得引物 |
質(zhì)粒構(gòu)建,引物測試及目標(biāo)基因擴增 |
6 |
階段報告 |
質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞 |
6-8 |
階段報告(提供熒光照片) |
活性驗證 |
7-10 |
階段報告 |
獲得單克隆細(xì)胞 |
35 |
獲得30個細(xì)胞株 |
單細(xì)胞株突變體鑒定 |
10 |
總結(jié)報告 |
總周期:3-3.5月 |
2.基因組編輯動物細(xì)胞系建系流程圖:
3.服務(wù)流程
案例展示
案例說明
X建立基因組編輯細(xì)胞系的優(yōu)選策略之多個sgRNA同時使用以高效實現(xiàn)目標(biāo)基因的靶向突變:
雖然有報道利用一對sgRNA,可以刪除長至200 kb的基因組DNA片段,但是刪除100-200 bp相較而言更容易實現(xiàn),更為重要的同時使用多個sgRNA,可顯著提高基因組靶向突變的成功率,如果實現(xiàn)刪除則有利于后面篩選時的基因型鑒定。
在哺乳動物的基因組編輯中,一般建議同時使用(測試)3個sgRNA
以提高工作效率
參考文獻(xiàn)
參考文獻(xiàn)
X參考文獻(xiàn)